银杏外种皮 多糖 环磷酰胺 免疫调节

银杏 Exotesta多糖环磷酰胺免疫调节

摘要：目的研究含或不含银杏蛋白的粗多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节活性。 方法用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型，测定巨噬细胞在腹部活动中的作用。 采用分光光度法测定抗体产生细胞的能力。 用免疫器官指数观察免疫器官重量的变化。 结果表明GBEP可以增强小鼠吞噬鸡红细胞的巨噬细胞，显着提高小鼠体内溶血素的含量，显着提高免疫抑制小鼠的脾脏指数。结论GBEP可以增强免疫缺陷小鼠的免疫功能。小鼠，没有蛋白质的粗多糖比具有蛋白质的粗多糖具有更好的免疫活性。

关键词：银杏 多糖; 环磷酰胺 免疫调节性

各种重要的生理功能主要包括诱导体内免疫物质的产生，增强人体免疫功能，抑制肿瘤的生长和扩散，降低血糖和降低血脂 。 近年来的研究表明，银杏外果皮中未脱蛋白的粗多糖可以杀死肿瘤细胞，增加SOD的形成，改善人体的免疫细胞活性并增强人体的免疫功能[1〜4]，但与脱蛋白有关[ [3]尚无关于胚芽多糖活性的报道。 本文研究了银杏胞外多糖和去蛋白多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响，希望为银杏胞外多糖的研究和开发提供科学依据。

1设备

1.1仪器Beckman DU640紫外分光光度计，美国Beckman Coulter； 杭州蓝田实验室仪器厂防水电热水浴； BH- 2型OLYMPUS显微镜，日本奥林巴斯； 蔡氏荧光显微镜，德国蔡氏公司。

1.2材料和试剂银杏胚珠未脱蛋白的粗多糖，表示为GBEP-1，多糖含量为38.49％； 使用GBEP-2脱蛋白的银杏肠外粗多糖，表明多糖含量为42.80％，均在我们实验室制备； 小鼠（清洁级KM小鼠），购自上海松弛实验动物有限公司，证书编号：SCXK（上海）2002-0010，繁殖环境清洁，证书编号：SYXK（Su）2002-0007； 环磷酰胺粉末（CTX），江苏恒瑞药业有限公司； 黄芪注射液，成都刁九鸿制药厂； 氯化钠注射液），南京小鹰制药厂; 肝素钠注射液江苏万邦生化药业有限公司； Giemsa染色液，南京建城生物工程研究所。

5％的鸡红细胞悬液：从市售肉鸡中收集约10 ml血液，用肝素盐水抗凝，然后以0.9：1的比例添加0.9％NaCl注射液，混合均匀并洗涤， 3以000 r / min离心15分钟，弃去上清液，并将剩余的红细胞清洗2至3次。 取4 ml洗涤并离心的红细胞，用0.9％NaCl溶液制备，使其浓度达到5％，然后准备立即使用[5-7]。 10％补体：从5个不同的产仔中取豚鼠血液，分离并合并血清，然后将血清与生理盐水混合至10％的浓度，并保存以备后用。

2方法

2.1小鼠腹膜巨噬细胞吞噬实验取70只体重18-22 g的小鼠，随机分为7组，每组10只，♀♂半数， 正常组和CTX模型组（蒸馏水20 ml / kg），阳性药物黄芪注射液组（0.1 ml /头），GBEP-1大剂量和小剂量组（300、100 mg / kg），GBEP- 2大剂量和小剂量组（300，100 mg / kg）。 除阳性药物组（肌注）外，其余各组动物均以20 ml / kg ig的剂量灌胃（ig），连续7天，每天ig，连续5天，第5天正常对照组除外 另外，每组动物腹膜内注射40mg / kg的CTX（0.1ml / 10g），并在第6天重复一次注射。 在最后一次给药后一小时，每只小鼠腹膜内注射0.5ml的5％鸡红细胞悬液。 给予鸡红细胞两小时后，处死小鼠。 根据文献[5，6]方法测定腹膜巨噬细胞的吞噬功能，并根据下式计算吞噬百分比和吞噬指数。 吞噬作用百分比（％）=吞噬鸡红细胞200个巨噬细胞的巨噬细胞数量×100％

吞噬指数=吞咽200个巨噬细胞的鸡红细胞数量

2.2小鼠溶血素抗体的产生实验及其对免疫器官的影响将70只体重为18-22 g的小鼠随机分为7组，每组10只，每只一半。 他们是正常组和CTX模型组（蒸馏水20 ml / kg），阳性药物黄芪注射液组（0.1 ml /只），GBEP-1大剂量和小剂量组（300，100 mg / kg），GBEP-2大剂量和小剂量组（300，100 mg / kg）。 除了阳性药物组（肌注）外，每组的动物均进行胃内给药（ig）。 给药剂量为20ml / kg，每天一次，连续12天。 给药后第5天，每组动物腹膜内注射每只动物0.2ml的5％鸡红细胞悬液以进行免疫。 10天后，除正常对照组外，每组动物腹膜内注射CTX 40 mg / kg（0.1 ml / 10 g），在第11天重复注射，最后一次给药后2小时采血 从小鼠的眶后静脉丛开始，根据文献[5〜7]的方法测定溶血素的形成。 将采血后的小鼠处死并称重。 然后称量他们的胸腺和脾脏，以计算胸腺系数和脾脏系数。